绿僵菌几丁质酶的分离纯化及性质

从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌（Metarhiziumanisopliae）,它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、PhenylSepharoseTM6FastFlow疏水柱层析等方法，得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量为61.5kD，而经质谱分析为57.14kD.最适反应温度为55℃，最适反应pH值为6.0，酶的等电点pI为4.02，其N末端序列为VIGPAAPL，用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2%.水解几丁质的Km为14.5μmol？L-1.该酶在45℃，pH值3.0～9.5较为稳定.Zn2+、Ca2+、Ba2+和Mn2+离子对几丁质酶活性有明显的促进作用，而Hg2+、Co2+和Fe2+离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制，表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大，丝氨酸可能是酶活力的必需基团.