蜡状芽孢杆菌ZJB-07112酰胺酶的分离纯化及其酶学性质

用一株蜡状芽孢杆菌新菌株ZJB-07112(BacilluscereusZJB-07112)发酵生产酰胺酶，经超声波细胞破碎、HighQ阴离子色谱、Phenyl-Sepharose疏水色谱等步骤获得了凝胶电泳均一的酰胺酶。用12.5%SDS-PAGE测得该酶的分子量约为60.6kD。其N端氨基酸序列为ATIRPDDKAI。该酶水解反应的最适pH和最适温度分别为7.5和35℃。在pH7.5条件下，该酶在50℃以上容易失活，60℃保温30min后，仅保留10.8%的酶活。除了Hg+、Ag+等重金属离子和尿素外，其他金属离子和EDTA对该酶的活性影响不大。以丙烯酰胺为底物时，该酶的Km和Vmax值分别为2.64mmol·L-1和0.6μmol·min-1·ml-1。