渗透剂与人工伴侣耦合辅助苹果酸脱氢酶包含体的复性

苹果酸脱氢酶不仅是一种重要的糖代谢酶，而且具有较高的经济价值和理论研究价值。为了获得苹果酸脱氢酶包含体的有效体外复性方法，本文将渗透剂（蔗糖，甜菜碱，海藻糖）与人工伴侣体系（CTAB/β-CD）耦合，进行了大肠杆菌苹果酸脱氢酶（eMDH）包含体的体外复性研究。结果发现，人工伴侣与蔗糖或甜菜碱耦合，可明显提高eMDH包含体的复性效果，复性后产物的活性较稀释复性提高了2倍以上;但未发现海藻糖与人工伴侣存在这种耦合作用。同时发现，耦合作用还可降低人工伴侣体系中CTAB与β-CD的最佳配比（从1∶8下降到1∶6），从而可提升人工伴侣体系的总用量，实现较高酶浓度条件下的有效复性。另外，利用渗透剂对蛋白质的热保护作用，实现了在较高温度（15℃）下eMDH包含体的复性。对复性产物结构的初步分析发现，耦合作用可使eMDH分子的α-螺旋及二聚体含量明显增多，因此复性产物的活性也显著提高。