产碱杆菌DN25的氰降解代谢途径分析与产酶条件优化

本实验室分离保藏的一株产碱杆菌Alcaligenessp.DN25具有较高降氰活性，通过分析氰降解代谢产物确定了其降解途径，并根据降氰酶催化活性部位特征对产酶条件进行了优化。结果显示，氰的降解代谢途径可推断为由氰水解酶、氰水合酶和酰胺水解酶共同作用的水解途径，而其中氰水解酶的活性占主要作用；在培养基中分别添加4种含硫物质，发现DL-半胱氨酸对菌体产酶有明显促进作用，DL-甲硫氨酸能同时提高菌体的产酶水平和细胞生长量。此两种物质添加量为0.8%时，单位发酵液酶活力可分别达到1.26U·ml-1和2.10U·ml-1。在1L三角瓶中进行扩大培养优化，得到最佳培养条件：装液量100ml，pH9.0，接种量8%，在基本培养基中添加0.8%的DL-甲硫氨酸。菌株的生长曲线和产酶曲线趋势基本一致，培养40h后进入稳定期，单位发酵液酶活力平均值为2.18U·ml-1，是优化前的3.46倍。