水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体的构建及遗传转化研究

为研究水稻热激转录因子基因OsHsfA7的功能及其在水稻耐热育种方面的应用价值，本文通过构建水稻OsHsfA7基因RNA干扰载体获得功能抑制变异材料，从反向遗传学进行基因的功能分析。扩增OsHsfA7cDNA3’编码区470bp片段，分别以反向和正向插入到中间载体pBSK连接的GUS片段两侧,然后将得到的RNA干扰片段克隆到改造的植物表达载体p1301M，构建以CaMV35S启动子驱动表达的水稻OsHsfA7基因RNA干扰表达载体。将该载体转入根癌农杆菌EHA105后，采用农杆菌介导法进行了水稻日本晴品种的遗传转化，获得了23株具有潮霉素抗性的转基因植株，其中12株经GUS染色呈蓝色并且DNA检测10株已插入目的片段，RNA检测其中6株OsHsfA7基因的表达水平下降甚至未检出。结果说明本研究构建的OsHsfA7基因RNA干扰载体对该基因表达沉默是有效的。