应用二抗技术建立灵敏检测奶中孕酮含量的酶联免疫分析法（EIA）

本研究应用二抗技术建立了灵敏检测奶中孕酮含量的酶联免疫分析法（ＥＩＡ）。微量滴定板首先包被二抗（羊抗兔ＩｇＧ），４℃孵育过夜。免疫反应溶液中包括２μｌ的奶样（用分析缓冲液稀释至２０μｌ），５０μｌ酶标孕酮和５０μｌ抗体。标准曲线的测试范围为０．２～１２．５ｐｇ／孔，相当于０．１～６．２５ｎｇ／ｍｌ，最小可测量０．１５ｐｇ／孔，５０％结合率对应的孕酮浓度是０．９２ｐｇ／孔。样品测定的平均批内与批间变异系数分别是４．６８％和１１．１０％。样品测定的回收率为９２．６７±１０．７９％。应用该方法测定全奶样品所得结果与应用ＲＩＡ测定结果高度相关（ｒ＝０．９７，ｎ＝４８，ｐ＜０．００１）。结果表明该方法的灵敏度是本室ＲＩＡ的８０倍，与直接包被孕酮抗体的ＥＩＡ相比较，可以节约珍贵的抗孕酮抗体和酶标孕酮。