苹果体细胞无性系变异的RAPD评估

以苹果栽培品种Gala试管苗叶片为材料,将叶片刺伤后接种于附加了BA1mgL、2,4D05mgL和NAA5mgL的MS培养基,黑暗培养7d后转移至附加BA1mgL的MS培养基,继续暗培养40d,97%叶片发生直接类型体细胞胚胎,单位叶片平均再生体细胞胚胎25个。对来自同一植株上的前3片展开叶中的1片叶进行组织培养,再生得到15株直接体细胞胚胎发生、植株再生后代。应用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析技术,以供体(原初供体)为对照进行了供体和再生体间及再生体彼此之间体细胞无性系变异研究,没有观察到供体和再生体间及再生体彼此之间有DNA多态性;接着用同样的方法对上述15株体细胞胚胎植株随机抽取7个单株单叶进行培养,得到二代直接体细胞胚胎植株,分别从7个单株单叶再生的二代植株中各随机抽取1株,再次用RAPD方法进行原初供体和二代再生体间及二代再生体之间体细胞无性系变异分析,结果二代直接体细胞胚胎植株5和引物OPF06组合中出现一条多态带,其分子量约为900bp,命名为OPF06900,重复3次多态性稳定。结果表明,苹果离体叶片直接体细胞胚胎发生途径再生植株的体细胞无性系变异率接近自然变异率