水稻几丁质酶的原核表达、复性及体外抑菌活性的研究

利用RT-PCR反应，从纹枯菌诱导的水稻叶片cDNA中克隆了1个水稻几丁质酶基因RC7的全长编码序列（ORF）。通过亚克隆方法，RC7与原核表达载体pGEX-4T-1上的GST融合，构建成GST-RC7重组蛋白的原核表达载体pGST-RC7，然后，将其转化到大肠杆菌细胞中。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，获得了以包涵体形式高效表达的GST-RC7。经过洗涤、溶解（变性）、复性及纯化等处理，包涵体中GST-RC7得到溶解、复性和纯化。纯化的复性GST-RC7蛋白具有几丁质酶活性。对6种重要作物病原真菌进行体外抑菌活性分析的结果表明，RC7可显著抑制水稻纹枯病菌、小麦纹枯菌、小麦赤霉菌、棉花黄萎菌、烟草赤星菌的菌丝生长，说明RC7可作为上述植物病害抗性基因育种的重要基因。