铁蟹过敏原的分离、鉴定和快速纯化

应用免疫印迹(Westernblot)的方法鉴定铁蟹过敏原组分，然后利用电泳洗脱的方法快速纯化主要过敏原。取磷酸盐缓冲液制备的铁蟹肉浸出液，经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，测定各组分的相对分子量，然后利用18例蟹过敏患者的血清进行免疫印迹，鉴定出主要和次要过敏原，利用普通垂直电泳槽快速洗脱主要过敏原蛋白，并鉴定活性。结果显示，SDS-PAGE显示铁蟹肉可辨条带有16条，相对分子质量在16.5～168kD之间。Westernblotting结果表明，铁蟹肉浸出液共有10条过敏条带，其中相对分子质量为76kD的蛋白条带，阳性反应率为100%，纯化后获取了76kD的主要过敏原，经过免疫印迹鉴定其具有免疫活性。表明相对分子质量76kD的组分为铁蟹主要过敏组分，快速电洗脱可以纯化相对分子量为76kD的过敏原组分。