根癌农杆菌介导转褪黑素基因草莓的获得

为建立根癌农杆菌介导的草莓褪黑素基因高效遗传转化体系，以草莓品种“早红”叶片和叶柄为外植体，优化了影响根癌农杆菌遗传转化的因素，包括农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间和预培养时间等，建立了适宜草莓“早红”的农杆菌遗传转化体系。结果表明，“早红”草莓适宜的转化条件是外植体的最适预培养时间为2～3d，农杆菌侵染的最佳菌液浓度为OD6000.3～0.5，最适侵染时间为15min，最适共培养时间为3d。在此基础上，通过根癌农杆菌介导法将褪黑素合成关键酶N-乙酰转移酶（AANAT）和羟吲哚-氧甲基转移酶（HIOMT）基因AANAT和HIOMT转入草莓基因组，并对获得的抗性植株进行PCR和PCR-Southernblot检测分析，结果表明外源基因已经整合进草莓基因组中。RT-PCR分析证明外源基因已经在转录水平表达。