杂花苜蓿SRAP-PCR反应体系的正交优化

利用正交设计L16(45)对杂花苜蓿(MedicagovariaMartin.)SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,旨在建立一套适用于苜蓿属(MedicagoL.)种质资源的SRAP标记技术体系。结果表明各因素对PCR反应结果都有显著影响,由F值可知,dNTP的量对反应结果影响最大,其次是Taq酶的量,模版DNA浓度的影响最小,各因素水平的变化对PCR反应的影响依次为dNTP>Taq酶>Mg2+>引物>模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立杂花苜蓿SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为dNTP2μL(0.20mmol·L-1),TaqDNA聚合酶0.3μL(1.50U),Mg2+3μL(1.50mmol·L-1),上、下游引物各1μL(0.40μmol·L-1),50ng模板DNA1μL,10×PCRbuffer2.5μL(不含Mg2+)。这一优化体系的建立,为今后利用SRAP标记技术进行苜蓿属植物遗传图谱构建、遗传多样性分析及种质资源鉴定等研究奠定了技术基础。