豌豆ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以豌豆(PisumsativumL.)DNA为材料,对影响其ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(模板DNA量、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶量、退火温度)进行优化,最终确定了豌豆ISSR-PCR反应的最佳体系(20μL)为15ng模板DNA,0.15mmol·L-1dNTP,0.5μmol·L-1ISSR引物,1UTaqDNA聚合酶,引物842号的最适退火温度为50℃。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行豌豆属种质资源的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。