紫花苜蓿MsRBP基因的克隆、分析及烟草的遗传转化

采用RACE技术以一段紫花苜蓿(Medicagosativa)盐诱导基因的EST(expressedsequencetag)序列为模板设计引物克隆此基因的全长序列。序列分析结果表明,该基因全长1551bp,包含一个1230bp的最大开放阅读框,编码409个氨基酸,包含3个RNA结合蛋白结构域(RRMdomain),命名为MsRBP(GenBankaccessionNo.JN986878.1)。亚细胞定位分析表明此基因编码蛋白定位于细胞核。经同源比对和进化树分析,MsRBP基因编码的氨基酸序列与截形苜蓿(Medicagotruncatula)、大豆(Glycinemax)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)等物种中的某些RNA结合蛋白的氨基酸序列具有很高的相似性。RT-PCR(Real-timePCR)分析结果表明,在NaCl,ABA和PEG胁迫下MsRBP基因的表达水平均上调,推测该基因可能在紫花苜蓿逆境胁迫调控中发挥重要作用。经构建植物超表达载体pBI21-MsRBP,采用农杆菌介导法对烟草(Nicotianatabacum)进行遗传转化,获得了抗性转化再生植株。通过PCR,RT-PCR及GUS组织化学染色分析表明MsRBP基因在烟草的基因组中能够进行转录和表达。本研究为该基因的功能鉴定与调控机制研究奠定了基础。