黄连产小檗碱内生真菌的分离鉴定

为探索黄连中是否存在产小檗碱的内生真菌,采用组织块法对黄连(CoptischinensisFranch.)中的内生真菌进行分离,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和大肠埃希菌(Escherichiacoli)为指示菌,用琼脂块法对分离的内生真菌进行抑菌活性试验,经摇瓶发酵培养后,用薄层层析法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)检测其代谢产物中的小檗碱,并对其产量进行分析,采用形态学和分子生物学相结合的方法对产小檗碱内生真菌进行鉴定。结果表明共分离获得12株内生真菌,其中菌株HL-BC对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性,TLC和HPLC检测结果显示,内生真菌HL-BC的发酵液中含有小檗碱,含量为0.664mg·L-1,根据形态学特征和5.8SrDNA-ITS序列分析,将其确定为拟茎点霉属(Phomopsis)。这表明黄连中存在能产生小檗碱的内生真菌,为发酵生产小檗碱及黄连的综合开发奠定了理论基础。