鱼类RAPD的影响因素及其最优反应体系的研究

？？？？在研究白鲢/团头鲂遗传图谱时,对RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析,并在些基础上建立了适于实验室RAPD研究的最佳反应体系:25μL反应体系中,含10mmol/LTris-HCl(pH8.0)、10mmol/LKCl、8mmol/L(NH4)2SO4、2mmol/LMgCl2、0.05%NP-40、0.2mmol/LdNTP、15ng引物、20ng模板、1.5UTaqDNA聚合酶。热循环参数为:95℃预变性3min,然后94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,共40个循环,最后72℃延伸6min。