奶山羊β-乳球蛋白基因及其调控区的克隆和序列分析

？？？？从奶山羊组织提取基因组DNA,根据已发表的山羊β-乳球蛋白基因(BLG)序列设计引物,用高保真长模板PCR法克隆得6个奶山羊BLG基因片段。这6个基因片段的大小和部分限制性酶切图谱与已发表的山羊BLG基因相同。部分序列测定结果显示:6个奶山羊BLG基因片段与山羊BLG基因相应片段的同源性为99%。进一步序列测定结果表明:奶山羊BLG基因5′调控区与山羊、绵羊和牛的同源性分别为99%、95%和90%,3′调控区与这些动物的同源性分别为99%、97%和92%。在乳腺特异表达调控元件集中的-406bp区域内,奶山羊BLG基因与山羊BLG基因有2个碱基的差异。所克隆的奶山羊BLG基因调控区与山羊BLG伪基因显著不同,其同源性仅为83%(上游调控区)和88%(下游调控区)。这些结果表明:不同种动物的BLG基因是高度保守的,高保真PCR克隆的奶山羊BLG基因调控区可用于乳腺特异表达载体的构建