马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

？？？？以重组质粒pGEX-MDgI在大肠杆菌BL21中表达马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648A株的囊膜糖蛋白I(gI)完整基因,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白条带,切下并碾碎后作为免疫原免疫小鼠,用以制备针对MDV648AgI糖蛋白的杂交瘤细胞株。以MDV感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)为检测抗原,用间接免疫荧光抗体反应(IFA)筛选到9株杂交瘤细胞株,选其中3株2H7、6F10、2H3制备腹水,其IFA效价均达到1∶1500以上;与I型MDV不同致病型的毒株CVI988/Rispens、GA、RB1B、Md11株感染的CEF测IFA,均呈现特异性荧光,但反应强度不同。腹水经PBS稀释后与MDV感染的CEF做斑点酶联免疫吸附试验,呈特异性显色。对MDV感染的CEF裂解物做West-ern-blotting,可检测出1条特异性条带