PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子

？？？？根据2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)与细胞外蛋白因子(EF)基因(mrp与epf)序列,分别设计、合成一对引物,建立聚合酶链反应(PCR)方法。该方法扩增出2型菌株的mrp大小为885bp,epf为626bp,而对马链球菌兽疫亚种(C群)、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等PCR均未扩增出任何条带。用Xba和Hae分别酶切PCR扩增产物,均获得与预计一致的酶切图谱,PCR扩增产物测序结果显示:其基因序列分别与GenBank上公布的mrp全基因第500～1315位碱基及epf全基因第2441～3028碱基对一致。PCR检测的敏感度可达100个细菌。用建立的PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测,检测的15株2型分离株中有13株mrp与epf均为阳性,为典型的高毒力表现型菌株(mrp+epf+),1株为mrp+epf-,1株为mrp-epf-。