PRRS病毒核衣壳蛋白基因的原核表达

？？？？根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR扩增出美洲型PRRSV的核衣壳蛋白(N)基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,再亚克隆到表达载体pGEX-6p-1谷胱甘肽S转移酶(GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃条件下诱导,经SDS-PAGE和Westernblotting分析,GST-N融合蛋白的分子质量约为39.5ku,另3种不同大小的GST-N降解产物,分子质量分别为33.0、30.5和27.5ku,其中39.5和30.5ku的降解产物分别占菌体蛋白的30.9%和15.3%。结果表明:PRRSV核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中以GST融合蛋白的形式得到高效表达,且表达产物能与PRRSV抗体阳性的猪血清发生特异性反应,可作为PRRS诊断抗原