原核真核双表达加强型绿色荧光蛋白质粒的构建

？？？？将原核启动子Ptrc和加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因从EGFP原核表达质粒pYA3334-EGFP上切下,然后将其插入至真核表达质粒pVAX1真核启动子Pcmv的下游,构建成具有真核和原核启动子的双表达杂合质粒pVAXD-EGFP,其长度为3823bp。将pVAXD-EGFP分别转化鼠伤寒沙门氏菌X4550和转染COS-7细胞,应用流式细胞术、可见光谱扫描、SDS-PAGE测定EGFP原核表达;应用荧光显微镜观察EGFP在COS-7细胞内的表达。重组鼠伤寒沙门氏菌X4550(pVAXD-EGFP)表达EGFP的量与仅以原核方式表达EGFP的X4550(pYA3334-EGFP)相当;将质粒pVAXD-EGFP转染COS-7细胞,EGFP可在COS-7细胞核和胞浆表达,在荧光显微镜下发出强烈荧光。结果表明:不仅成功地构建原核、真核表达集中于同一质粒的新型质粒pVAXD-EGFP,而且原核、真核目的蛋白表达量达到很高水平,显示其在新型重组细菌疫苗方面有着诱人的应用前景