奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达

？？？？根据奶牛γ干扰素(BovIFN-γ)基因的cDNA序列设计1对引物,应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段。将RT-PCR产物克隆到Pucm-T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的BovIFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体PGEX-6P-1谷光甘肽S转移酶基因的下游,经IPTG诱导后,表达出42ku的融合蛋白,薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的25%。通过细胞病变抑制试验证实,融合蛋白具有较好的生物学活性,在牛肾细胞上抑制水泡性口炎病毒的活性可达到16384U？mg-1,有望成为预防和控制奶牛疾病的新产品。