人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备

？？？？根据已发表的人表皮生长因子(hEGF)mRNA序列设计引物,上游引物5＇端引入山羊β-乳球蛋白信号肽序列。PCR从人肝脏混合单链cDNAs中扩增出hEGFcDNA;测序表明,克隆的hEGFcDNA与已发表的序列完全相同;经SignalpV1.1软件分析,山羊β-乳球蛋白信号肽序列与hEGFcDNA能在预计位点切割。将此cDNA克隆到pGEX-6P-1中,经IPTG诱导,在BL21(DE3)大肠杆菌中表达约32ku的GST-hEGF融合蛋白。将此cDAN插到pcDNA-3中,用此重组质粒免疫青紫蓝兔,经6次免疫后获得抗hEGF的多克隆抗体,该抗体能识别GST-hEGF融合蛋白。