雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达

？？？？采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因，用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系，可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术，将GFP基因插入到pMP206/ERE启动子CYC1的下游，用GFP取代LacZ基因，并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定，发现有雌激素受体基因(hERcDNA)和GFP基因特异条带，说明hERcDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒，表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后，与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比，以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁，也不需要底物，可在96孔板中完成，这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。