非抗性RNAi载体及沙门氏菌递送系统的构建

？？？？为了获得一种新型、高效、安全的siRNA片段的递送系统,应用PCR方法扩增的RNAi-ReadypSIREN-RetroQZsGreen载体中包含了U6启动子的3.6kb的产物,特产物与限制性内切酶BglⅡ酶切平衡致死系统质粒PYA3334所得的1.8kb携带链球菌asd基因的DNA片段相连接,转化X6212感受态细胞,通过平衡致死系统和抗性筛选得到非抗性的目的克隆。结果成功构建了非抗性RNAi载体,命名为pSIREN-ASDZsGreen,并将此转化X4550,最终获得稳定性的递送系统。该载体及减毒鼠伤寒沙门氏菌递送系统为今后RNAi干扰技术应用于动物病毒性疾病预防和控制的研究及转基因生物工程产品的研制打下了基础。