P277多肽的表达、纯化及初步药效学分析

？？？？通过PCR方法得到P277多肽基因,插入到含门冬酰胺酶？C？端第199～326氨基酸残基片段的后面,形成融合蛋白,中间预留酸水解位点,并在P277多肽和融合蛋白之间加入一段碱性序列,构建pET28AnsB？C？KR？P277高效表达载体。克隆的基因在大肠杆菌中高效表达,通过TritonX？100洗涤、乙醇分级沉淀纯化融合蛋白AnsB？C？KR？P277,酸水解后经等电点沉淀去除杂蛋白,再经阴离子交换柱层析,进一步分子筛脱盐,可得到纯化的目的多肽P277。这种多肽生产平台,为多肽生物合成提供了一个很好的方法。纯化后的P277免疫Ⅰ型糖尿病模型动物NOD(non\|obesediabetic)小鼠,可明显降低NOD小鼠自发性糖尿病的产生。