SYBRGreenI实时定量PCR方法

？？？？利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107bp片段,并克隆到pMD？19？T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线。再以提取的PCV？2、PCV？1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测。结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(？C？？t)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为？-0？32,？相关系数？r？？2为0？997,？C？？t值为11？9～26？9。PCV？2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV？1、PPV和PRV均不能扩出。对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44％(14／32),病毒载量均小于10？4拷贝？μL？？-1？;PMWS可疑猪阳性率96？8％(31／32),病毒载量均大于？10？5拷贝？μL？？-1？。？实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测。