利用SMART技术构建鸡法氏囊全长cDNA表达文库

？？？？为构建鸡法氏囊组织互补DNA(cDNA)文库,从3周龄鸡法氏囊组织提取总RNA,用偶联oligo(dT)磁珠纯化mRNA,用SMART(Switchingmethanismat5"endofRNAtranscrip)技术合成cDNA第1链,用LD-PCR方法扩增双链cDNA.经SfiI酶切消化后,用CHROMASPIN-400柱去除400bp以下小片段,获得的双链cDNA与同样酶切的pMyr表达载体连接,电转化大肠杆菌获得cDNA文库.初始文库容量为2800000cfu,重组子比例为100%,插入片段的大小平均为1.2kb.扩增后文库容量为800000000000cfu/mL.所建文库为鸡传染性法氏囊病毒受体基因克隆及功能研究奠定基础.