F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法

？？？？运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素？fedF？亚单位内的第60~109位氨基酸残基区段(？fedF1？)和？fedF？全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL\|fedF或pnirBMisL\|fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中？GG？型和？AG？型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而？AA？型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌？毛FedF？亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素？fedF？基因及其基因片段？fedF1？在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,？fedF？1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。