人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体研制与生物学活性测定

？？？？根据GenBank中发表的血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体Ⅱ(KDR)基因序列,设计1对引物经RT-PCR从人脐静脉内皮细胞中克隆出KDR胞外Ⅲ区(KDR？？D3？)编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-6P1。重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃条件下诱导,经SDS-PAGE和Westernblotting分析,表达出的融合蛋白大小为33？4ku。利用纯化的重组融合蛋白免疫BALB／c小鼠,经淋巴细胞杂交瘤技术筛选获得\{2株\}KDR特异性单克隆抗体C4和F6。\{2株\}单抗均能特异性识别HUVEC细胞表达的天然KDR分子,HUVEC迁移抑制试验和HUVEC体外血管形成抑制试验结果显示,2株单抗均能特异性阻断血管内皮细胞生长因子与KDR分子的相互作用。结果表明:所获得的2株单抗对KDR具有良好的特异性和中和活性。