荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的研究与应用

？？？？利用常规PCR扩增出猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2保守区域276bp片段,将其克隆到pMD\|18载体,以pMD\|18T\|276质粒DNA作为标准质粒模板优化反应条件,建立定量检测PCV2的荧光定量PCR方法。结果表明:\{？Ct？值\}与标准品模板在5？60×10？1～2？74×10？9拷贝？μL？？-1？范围内呈良好的线性关系,相关系数为-1？00,斜率为\{-3？345\}。所建立的方法与猪1型圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖障碍与呼吸系统综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒均无交叉反应。应用该方法对PCV2感染细胞后的复制情况进行了研究,结果显示在感染细胞96h时,PCV2复制达到最高点。此外,利用建立的方法对保存的11个分离株在PK15细胞上繁殖特性进行了研究,筛选到4株高滴度毒株,丰富了圆环病毒疫苗株的研究资源。