抗大肠埃希氏菌987P粘着素单克隆抗体的产生及其特性测定

？？？？用饱和硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶柱层析法从987P~+大肠杆菌培养物中分离和提纯987P抗原。以此抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O―Ag14融合,获得两株能分泌抗987P特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为EP-22和EP-G1。经多次克隆化后,他们在体外培养中能稳定分泌高效价的特异单克隆抗体,于液氮中冻存三多个月。复苏后其分泌抗体能力仍不变。EP―22和EP-G1的腹水单抗,免疫荧光滴度高达10~5-10~6,直接凝集滴度均为2―4×10~2。EP-22培养上清的单抗免疫荧光滴度可迭10~2-10~3,直接凝集滴度为16―32。在间接免疫荧光和琼扩试验中,这两株单抗对所试的987P~+标准菌株和野毒菌株均具有高度的特异性,对不含987P而含其它粘着素(K88或K99或F41)的菌株以及肠菌科之其他细菌都不发生交叉反应。他们对pH2-9.8及4-56℃有较强抵抗力。用EP-22株小鼠腹水单抗直接标记的单克隆荧光抗体效果好,特异性高。EP-22和EP-G1单抗的免疫球蛋白亚类均属IgG1。