红豆草ISSR体系优化及其在航天诱变种质鉴定中的应用

？采用正交设计法优化适合于红豆草（Onobrychisviciaefolia）的ISSR体系，对影响ISSRPCR的多个因素，包括dNTP、引物浓度、Taq酶浓度、Mg2+浓度进行了4因素3水平的比较、优化，建立了红豆草的ISSR最佳反应体系。运用该体系进行引物及最佳退火温度的筛选，并应用ISSR分子标记技术初步分析红豆草航天搭载诱变效应。结果表明，红豆草ISSRPCR最佳反应体系为2.5μL10×PCRbuffer、50ng模板DNA、dNTP0.2mmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.4μmol/L、Mg2+2.0mmol/L，总体积为25μL。试验从53个ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的12个引物，并依次筛选出各引物的退火温度。12个引物标记结果显示共获得多态性位点142个，多态性比率为73.6%。地面对照的多态位点比率(P)、Nei基因多样度(h)和Shannon多样性指数(I)均低于航天诱变种，太空环境能够诱导红豆草发生基因变异。航天诱变可作为红豆草种质资源创新和品种选育的方法之一。