山生柳SSRPCR反应体系优化

？本研究以祁连山4个海拔梯度的山生柳（Salixoritrepha）为材料，采用L9(34)正交试验设计和单因子试验，分析山生柳SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响，并对引物SHUK123的适宜退火温度进行优化。结果表明，PCR反应体系的最佳条件20μL体系中2.0mmol·L-1Mg2+1μL，0.10mmol·L-1？dNTPs1.5μL，0.5UTaq酶用量为1μL，20ng·μL-1DNA模板1μL，0.5μmol·L-1的上下游引物各2μL，10×TaqBuffer2μL，ddH2O加至20μL。扩增反应程序94℃高温预变性时间3min，94℃变性45s，Tm(不同退火温度)退火时间45s，72℃延伸30s，循环数30个，最后72℃后延伸时间5min，4℃保温。适宜退火温度为56℃。以上结果表明，此反应体系在山生柳PCR扩增中的稳定性和可重复性较好。