血管内皮生长因子人单链抗体*——基因克隆、高效表达、亲和力成熟及生物活性鉴定

利用抗体噬菌体展示技术,克隆了血管内皮生长因子人基因工程单链抗体,抗体表达量达菌体总蛋白的45%.用层析柱复性技术同步完成抗体的纯化和复性.生物活性实验表明,该抗体不仅特异结合人VEGF165,而且竞争抑制VEGF165与其受体的结合.为了提高单链抗体的亲和力,采用错配PCR法,随机突变抗体重链可变区基因,建立次级抗体突变库,并从中筛选出高亲和力突变株.研究了抗体突变株蛋白质三维结构特点及其与亲和力的关系,这些结果不仅为肿瘤血管靶向治疗奠定了基础,而且为抗体的高效表达及其亲和力体外成熟提供了参考模型.