水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns6的表达及其单克隆抗体的特异性分析

水稻矮缩病毒(RDV)的基因组包含12条双链RNA,其中基因组片段S6编码的非结构蛋白Pns6为该病毒的运动蛋白.在本研究中,在大肠杆菌中表达了N端融合His-tag的重组Pns6蛋白.在低温和低IPTG浓度的诱导后,通过Ni螯合亲和层析进行纯化获得了HisPns6蛋白.稳定性分析表明,HisPns6是一个稳定的蛋白,可耐受37℃下长达24h的处理.纯化的蛋白后续用于单克隆抗体的制备并得到18个杂交瘤细胞株系.使用从感染RDV的水稻叶片中提取的Pns6为样品,以健康水稻总蛋白为对照,通过Westernblot法对抗体进行特异性分析,获得了15个阳性抗体.对其进行抗原决定簇分析表明,最敏感的抗原决定簇位于Pns6的C端区域(296~509位氨基酸).该结果与生物信息学预测分析相吻合.