猪繁殖与呼吸综合征病毒准种多样性在抗体选择压下的演变

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株SD0612准种的多样性,将野毒株SD0612原始毒的细胞培养物提取RNA,并扩增和克隆其高度易变的ORF5基因,选取所有阳性克隆子测序,并以DNAStar软件对序列进行分析,以ORF5序列的多样性来显示准种的多样性.结果显示,SD0612野毒株ORF5基因获得的60条序列的核酸同源性介于97.7%与100%之间,这种差异代表了不同准种的序列差异;60条核酸序列中17条序列完全相同,代表了在该种群中占主体的优势准种的序列.为研究PRRSV准种的这种多样性在抗体选择压下的演变规律,将SD0612株在Marc-145细胞上分别进行有抗SD0612抗体和无抗SD0612抗体两个系列的连续传代,每个传代系又包括3个平行的传代系列,连传40代后得到传代毒A40~F40.将有SD0612抗体传代系列的第40代毒F40作为新的起点按上述方法进行第二轮传代,连传40代后分别得到传代毒a40~f40.将两轮传代第40代病毒按针对原始毒的方法扩增其ORF5基因以进行准种多样性分析.结果显示,SD0612株在有抗体的两次连续传代中准种的多样性均在减少,其优势准种在种群中的比例在上升,而无抗体传代组优势准种在种群中的比例在下降.该研究显示,野毒株SD0612是由多个准种组成的种群,抗体的选择压能够显著减少PRRSV的准种多样性,并可能使某些准种演变为新的优势准种.