转EPO基因成肌细胞移植治疗大鼠肾性贫血的实验研究

以产病毒包装细胞上清转染原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞和皮肤成纤维细胞,经G418筛选得到转染成功的阳性克隆,分别命名为Myo/EPO和Fib/EPO.将抗性克隆扩增并测定培养上清中EPO活性,供大鼠移植.肾性贫血大鼠经乙醚麻醉后,通过多点肌注及皮下注射分别将Myo/EPO和Fib/EPO植入大鼠体内,动态检测各组大鼠外周血象,定期测定大鼠血清EPO含量及移植部位肌组织hEPO分泌情况.结果表明,对照组(Myo/X)大鼠血红蛋白(Hb)和红细胞压积(HCT)进行性降低,而治疗组大鼠(Myo/EPO)的Hb和HCT在移植后14d,由移植前的(92.5±3.0)g/L和0.29±0.04升至(103.8±5.0)g/L和0.32±0.04,之后逐渐下降,但仍高于或维持移植前水平达90d,Fib/EPO细胞移植的作用特点与Myo/EPO组类似;Myo/EPO细胞移植前大鼠血清EPO的浓度已测不出,移植后30,60d测得EPO的浓度分别为(4.2±1.3)、(3.3±0.9)mU/mL;以PCR和免疫组化方法对移植后60d大鼠肌注部位的肌肉组织进行检测证实,移植部位肌组织存在hEPOcDNA,并且分泌EPO蛋白.结论:以大鼠骨骼肌成肌细胞作为EPO基因治疗的靶细胞进行大鼠体内移植,可以较持久地改善大鼠肾性贫血症状,具有潜在的应用价值,为临床上EPO基因治疗提供了实验依据