酵母tRNAAla中修饰核苷酸T54,Ψ55的生物功能

酵母tRNAAla的3′半分子与一个11聚的DNA片段(5′GGAATCGAACC3′)杂交后用RNaseH酶解,该酶能在Ψ55的3′侧定点剪切,这样就制备得片段C36-Ψ55该片段经1～2个高碘酸氧化和β-消去得片段C36-T54和C36-G53机器合成了3个酵母tRNAAla的片段,分别j是片段C56-A76,U55-A76(以U替代Ψ55)和U54-A76(以UU替代T54Ψ55).合成和制备的片段以适当的组合用T4RNA连接酶连接,产物是酵母tRNAtRNAAla的3′半分子或其类似物.3种3′半分子或其类似物分别与天然5′半分子连接得重组天然酵母tRNAAla(tRNAr)和2个酵母tRNAAla的类似物:(1)tRNAa(以U替代Ψ55),(2)tRNAb(以UU替代T54Ψ55).体外测定了它们的丙氨酸接受活力和参入活力,发现酵母tRNAAla的类似物tRNAa和tRNAb与天然重组酵母tRNAAla相比,它们的氨基酸接受活力分别降低了25%和55%,参入活力分别降低了35%和30%.说明酵母tRNAAla中的修饰核苷酸T54和Ψ55对该tRNA的功能有重要的影响.