截短和融合的绿色荧光蛋白的表达及其荧光特性

水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白(GFP)是一种能发射强烈荧光的特殊蛋白质,其荧光的产生是由于内部第65～67位的Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成生色基团的缘故.Ser65→Thr(简称S65T)突变型的荧光强度较野生型GFP高出6倍,并且其激发波更长,肉眼可见发出的强烈荧光.将gfpS65TP基因从3′端截短36bp,不影响GFPS65T的荧光特性,但当截短到225bp时,几乎失去了荧光特性.将HBVe抗原基因与突变型gfpS65TP融合,发现其激发光谱又回复到野生型状态.虽然其荧光强度与gfpS65TP相似,但发射波谱变宽且肉眼不能观察.若将表达这种融合蛋白的菌落在低温下存放数日,则又恢复了它肉眼可见的绿色荧光.以上结果说明GFP的发光机制除与生色基团有关外,也与GFP分子的构象完整性和分子内微环境有关,野生型GFP与HCVCore抗原的融合也证实了这一点.