林肯链霉菌谷氨酸合酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤和吸附层析等方法,分离纯化了林肯链霉菌谷氨酸合酶,电泳鉴定为单一组分.这是链霉菌中的第1例.谷氨酸合酶很不稳定,向酶缓冲液中加入α-KG,PMSF,EDTA,β巯基乙醇和甘油可以大大提高其稳定性.测得全酶分子量为138ku,亚基分子量为81和57ku,表明该酶由2个不相同的亚基构成.吸收光谱在380和440nm附近没有吸收峰,表明该酶是不含铁的非黄素蛋白质.该酶反应的最适pH为7.2,最适温度为30℃.该酶对NADH,αKG和L-Gln的表观Km值分别为5.21×10-5,4.17×10-4和4.35×10-4mol/L.以NADPH代替NADH作电子供体,该酶仍表现出部分活力.反应产物Glu和NAD+,部分金属离子、氨基酸及三羧酸循环中间物对该酶活力有不同程度的抑制作用.