GABA/孕酮激发豚鼠精子聚磷酸肌醇降解及其在顶体反应中的作用

为了研究GABA/孕酮(P4)激发精子聚磷酸肌醇(PPI)降解及其在顶体反应(AR)中的作用,将豚鼠精子在MCM培养基获能培养5.5h,32P-标记精子1h,经Percoll密度梯度离心洗涤,然后以AR刺激剂激发精子AR,并对精子膜脂进行提取、分离和鉴定,同时,以相差显微镜评价精子AR%.结果为:(i)GABA刺激二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)和一磷酸磷脂酰肌醇(PIP)迅速降解,而磷脂酸(PA)增加;在5min时PIP2和PIP明显下降,10min几近完成,而AR明显滞后,15min才达到峰值;(ii)A23187,P4和GABA均可激发PPI降解和AR增加,其能力依次为A23187＞P4≥GABA;(iii)新霉素可明显地抑制Ca2+/GABA或P4及A23187刺激PIP2和PIP降解、PA产生和AR增加;(iv)PPI降解需Ca2+参与.当EGTA或Ca2+通道阻滞剂(La3+)存在时,PIP2和PIP降解,PA产生和AR升高均被明显抑制.上述结果表明,天然激动剂GABA或P4刺激豚鼠精子膜PPI降解是引起AR的基础,该作用是通过Ca2+介导、激活膜磷脂酰肌醇特异磷脂酶C(PIC)而完成的.