鸡Ⅱ型胶原基因疫苗pcDNA-CCOL2A1能有效治疗大鼠类风湿性关节炎

已证明Ⅱ型胶原(CII)是类风湿性关节炎(RA)最主要的自身免疫抗原,采用口服鸡Ⅱ型胶原蛋白(CCII)诱导免疫耐受治疗RA标志着RA治疗策略的重大进展之一.在国际上克隆成功鸡Ⅱ型胶原蛋白基因(CCOL2A1)的基础上,探讨了采用pcDNA-CCOL2A1基因疫苗策略治疗RA的科学性和可行性.将克隆的CCOL2A1基因连接于真核表达载体pcDNA3.1(＋)上,即为基因疫苗pcDNA-CCOL2A1.然后将该表达载体pcDNA-CCOL2A1转染COS-7细胞,经Westernblot分析显示,pcDNA-CCOL2A1在COS-7细胞中是以分泌型来表达CCII多肽链的α亚单位.随后,以CCII诱导的Wistar大鼠为RA模型即CIA,系统观察一次性尾部静脉注射20,200,400μg/kg3个不同剂量pcDNA-CCOL2A1基因疫苗对CIA关节炎的治疗作用.结果表明,在注射后第5天200μg/kg组就可观察到大鼠关节肿胀程度明显减轻,与空载体组比较有显著性差异(P<0.05),而20,400μg/kg两剂量组与空载体组比较未观察到治疗效果(P>0.05).注射后6周,CIA大鼠血清中抗CII抗体浓度水平、TNF-α浓度在200μg/kg治疗组较空载体组明显降低(P<0.05),而400μg/kg组则显著的升高,20μg/kg组则无明显变化.此外,细胞因子TGF-β,IL-10浓度水平在200μg/kg组较空载体组明显升高(P<0.05),而20与400μg/kg两组则无显著性差异.脾细胞淋巴细胞增殖实验表明,200μg/kg剂量pcDNA-CCOL2A1基因疫苗治疗组大鼠脾细胞对CII的反应能力较空载体组明显下降(P<0.05).此结果表明,200μg/kg剂量pcDNA-CCOL2A1基因疫苗能明显抑制CIA大鼠关节肿胀程度,降低抗CII抗体、TNF-α水平,提高细胞因子TGF-β,IL-10水平,降低脾细胞增殖反应能力,对CIA大鼠关节炎有显著的治疗作用.