绵羊胎儿成纤维细胞不同处理对核移植重构胚发育的影响

研究供体细胞代数、大小、周期以及基因转染处理对重构胚发育的影响.结果如下:(i)体外培养5~7代细胞做供体核,重构胚的桑椹/囊胚率显著高于16~18代细胞的桑椹/囊胚率(17.3%vs.4.9%,P<0.05);(ii)15~25μm细胞做供体核,重构胚的桑椹/囊胚率为20.0%,高于8~15mm细胞、25~33μm细胞桑椹/囊胚率(8.0%,9.7%),但效果不显著(P>0.05);(iii)血清饥饿与非血清饥饿的细胞做供体核,重构胚的桑椹/囊胚发育率没有显著性差异(11.8%vs.18.6%,P>0.05),但非血清饥饿的效果要好于血清饥饿;(iv)用0.05μmol/L秋水仙素处理供体细胞效果最好,重构胚的桑椹/囊胚率可达27.5%,而未处理或用0.1μmol/L秋水仙素处理供体细胞,重构胚的桑椹/囊胚率分别为17.1%和12.1%,但三者之间差异不显著(P>0.05);(v)以转染绿色荧光蛋白基因(GFP)细胞做供体核,重构胚的桑椹/囊胚率显著低于非转基因细胞做供体核的桑椹/囊胚率(3.1%vs.20.4%,P<0.05).上述结果表明,传代少、中等大小的细胞更适合做供体核;血清饥饿没有必要;用0.05μmol/L秋水仙素处理供体细胞有利于重构胚的发育;转基因供体细胞对重构胚发育有影响.