热胁迫下八字地老虎hsc70基因在不同组织转录表达差异性分析

【目的】为探讨八字地老虎xestiac-nigrum（linnaeus）xe-hsc70基因表达与高温耐受性之间的关系，比较热胁迫下xe-hsc70基因在不同组织中诱导表达的差异。【方法】本研究以八字地老虎4龄幼虫为研究对象，采用rt-pcr和race技术克隆获得编码热激同源蛋白70（70kuheatshockcognate，hsc70）的基因（命名为xe-hsc70）cdna全序列与基因组dna序列（genomicdna，gdna），并利用实时荧光定量pcr和westernblotting技术，比较分析不同热胁迫温度及不同热诱导时间下八字地老虎4龄幼虫体内马氏管、中肠、体壁、脂肪体与唾腺5个组织中xe-hsc70基因在mrna转录与蛋白表达两水平上相对表达量的变化。【结果】比较分析克隆得到的xe-hsc70基因cdna全序列和gdna序列，结果表明xe-hsc70基因含有8个内含子，最大内含子（561bp）位于5′端非编码区，并含有一个类似热激应答原件hse的核心结构序列（gaatatgcagaatgttccagaa），其余内含子（长度在86~218bp之间不等）均在编码区内，本研究首次报道了八字地老虎hsc70内含子的具体数目及位置。组织差异性分析显示：在常温25℃条件下，xe-hsc70在脂肪体中表达量最高，在唾腺中表达量最低；经热激诱导后中肠、唾腺与体壁组织中xe-hsc70的表达量与对照（25℃）相比显著上调，随着热激时间的延长，表达量呈现出先升高后恢复至对照水平的变化趋势，脂肪体和马氏管xe-hsc70表达量与对照相比无明显变化。【结论】八字地老虎不同组织在应对热胁迫的过程中，抗逆机制具有明显的差异。xe-hsc70的不断积累是八字地老虎对热胁迫不断适应的一个过程，其组织中xe-hsc70基因的高表达在八字地老虎抗热胁迫的过程中起着重要作用，并为从分子水平上研究八字地老虎的抗逆机理提供依据。