柞蚕kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂apktspi基因克隆及表达特征分析

【目的】克隆柞蚕（antheraeapernyi）kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂（apktspi）基因的cdna序列并进行序列分析，研究apktspi基因的组织表达分布及病原物免疫刺激后的表达模式，原核表达apktspi。【方法】利用race-pcr方法扩增柞蚕apktspi基因全长cdna，生物信息学软件进行序列分析，利用实时定量pcr检测柞蚕apktspi基因的组织分布及免疫刺激后的表达模式，利用pet-28a载体在大肠杆菌bl21中融合表达apktspi。【结果】柞蚕apktspi基因的cdna全长568bp，开放阅读框编码96个氨基酸，含一个kazal结构域。apktspi基因在柞蚕5龄幼虫脂肪体中特异性高表达，在核型多角体病毒、大肠杆菌和白僵菌免疫刺激后表达量都能上调，但上调的程度和时间都不同。apktspi在大肠杆菌中成功诱导表达。【结论】获得了柞蚕apktspi基因的cdna全长，并研究了apktspi基因的表达模式，为进一步研究其在柞蚕免疫中的功能及作用机理奠定了基础。