粘虫β-actin基因cdna的克隆、序列分析及表达量检测

β-actin基因作为actin家族的一员，在基因定量实验中常用作内参基因。本实验运用rt-pcr和race技术，以粘虫mythimnaseparata(walker)cdna为模板，对β-actin基因进行克隆获得全长cdna序列，并利用生物信息学方法，对β-actin基因全长cdna序列及推测得到的β-actin蛋白序列进行分析。结果表明，获得的粘虫核β-actin基因cdna序列长度为1472bp，其中包括68bp的5′非编码区、273bp的3′非编码区和1131bp的开放阅读框，编码一个376个氨基酸蛋白，具有actin蛋白家族典型特征。推测得到的粘虫β-actin蛋白理论分子量为41.7497ku，等电点为5.29，富含6种类型的特定功能位点。该蛋白序列与其他动物β-actin蛋白序列具有97.9%～99.7%高度同源性。β-actin表达量检测结果显示β-actin在6种不同组织间表达无显著差异（p>0.05），表明β-actin可作为研究粘虫不同基因表达水平高低的可靠内参基因。该基因的cdna序列已经递交genbank并获得登录号为gq856238。