褐飞虱flightin的原核表达及其在褐飞虱中差异表达检测

flightin最早发现于果蝇的间接飞行肌中，并且定位于粗肌丝。这种蛋白对维持肌节的结构和功能起到了重要的作用，但其在具有长短翅型分化的褐飞虱的不同翅型间差异并不清楚。本研究以长翅型雌虫褐飞虱cdna为模板，通过pcr扩增得到褐飞虱flightin基因orf全长，将其连接到表达载体pgex-6p-1中以与谷胱甘肽s-转移酶（gst）融合表达。将表达载体转入大肠杆菌表达株rosseta，在不同温度、不同浓度iptg的条件下诱导表达flightin，得到了最优表达条件，获得了高水平可溶性表达。在用gst抗体进行westernblotting验证gst-flightin融合重组蛋白表达的正确性后，我们通过gst柱纯化了的gst-flightin，进而用纯化后的蛋白免疫新西兰兔制备了高特异性的多克隆抗体。最后，我们用制备的多克隆抗体检测了长、短翅型雌成虫和不同发育阶段的褐飞虱体内flightin的表达差异。结果显示，flightin仅在长翅型成虫中表达，在短翅型雌成虫中未检测到其明显表达，而且flightin只在成虫期表达。本研究为进一步研究褐飞虱的flightin与其它蛋白互作、翅肌发育和翅型分化打下了基础。