棉铃虫钙粘蛋白n端多肽多克隆抗体制备及对bt抗性的初步检测

用重组表达的棉铃虫helicoverpaarmigera（hübner)中肠钙粘蛋白n端多肽片段制备兔多克隆抗体，并利用其对bt抗性进行鉴定。通过rt-pcr方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白n端多肽的基因片段cad285进行pcr扩增，将其克隆到pet-30a原核表达载体中，在大肠杆菌bl21（de3）中经iptg诱导表达，得到35ku的重组融和蛋白，融合表达的包涵体经过变性、ni-nta柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体，获得可溶性纯化蛋白，用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体，elisa检测其效价高于1∶16000；利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行westernblot分析，结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异，表明其能够应用对bt抗性进行初步检测。