小地老虎隐花色素基因cryptochrome1和cryptochrome2的克隆及mrna表达分析

隐花色素(cryptochrome，cry)是一类广泛存在于生物体内的蓝光和近紫外光受体，介导生物对蓝光的一系列反应并能导引生物钟。本研究利用rt-pcr和race方法获得了小地老虎agrotisypsiloncry1和cry2基因，分别命名为aycry1和aycry2。aycry1基因(genbankno．jq616846)读码框1587bp，编码528个氨基酸，预测分子量60.5ku，等电点6.68。aycry2基因(genbankno．jq616847)读码框2439bp，编码812个氨基酸，预测分子量92.1ku，等电点8.45。保守区分析表明:aycry1和aycry2均含有fad结合位点的phr区域和c末端保守区域。氨基酸序列比对分析表明，小地老虎的aycry1和aycry2分别与其它鳞翅目昆虫的cry1和cry2有很高的一致性，其中与棉铃虫helicoverpaarmigera的一致性最高，分别为89.5%和73.8%。nj聚类分析结果表明昆虫含有两类cry，即cry1和cry2，它们可分别以目为单位进行聚类，其中aycry1和aycry2分别与其它鳞翅目昆虫的cry1和cry2聚到一起。以室内饲养的小地老虎为材料，以3h为间隔检测了aycry1和aycry2的24h昼夜表达变化，结果表明这2个基因均表现出一定的昼夜节律性。aycry1和aycry2表达趋势白天高于晚上，表达峰值出现在zt7(zeitgebertime)。方差分析其昼夜波动差异不显著。