舞毒蛾几丁质酶基因的真核表达与重组病毒的获得

几丁质是昆虫外骨骼和围食膜的重要组成部分，鉴于几丁质酶在昆虫生长发育过程中发挥着举足轻重的作用，应用昆虫几丁质酶为探索新的生物防治害虫的方法提供了途径。本文分别根据苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因序列和编码舞毒蛾ⅰ型几丁质酶基因的开放阅读框设计引物，使用聚合酶链反应扩增出以上两个基因，全长分别为783bp和1737bp。构建重组质粒pfastbac-ldcht和pfastbac-acph-ldcht，转化大肠杆菌dh10bac后获得重组穿梭载体，通过脂质体介导转染sf9细胞产生重组杆状病毒acmnpv-acph--ldcht和acmnpv-ldcht，分别用于表达蛋白和获得重组病毒。细胞成功表达出有活性的舞毒蛾几丁质酶，并在棉铃虫体内扩增得到重组病毒。研究为深入了解昆虫几丁质酶性质提供依据，并为应用重组病毒奠定基础。